
小鼠CD3磁珠
¥1590.00
BeaverBeads? 小鼠 CD3 磁珠是通過共價偶聯(lián)的方式將鼠 CD3 抗體與磁珠結(jié)合,可以用來從小鼠脾臟細胞等單細胞懸液中快速有效去除 CD3+細胞。
- 產(chǎn)品貨號:70911-50
- 產(chǎn)品單位:支
- 產(chǎn)品說明:250uL,for 5*10^8 cells
產(chǎn)品簡介
BeaverBeads? 小鼠 CD3 磁珠是通過共價偶聯(lián)的方式將鼠 CD3 抗體與磁珠結(jié)合,可以用來從小鼠脾臟細胞等單細胞懸液中快速有效去除 CD3+細胞。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品特點
· 去除率可達99.7%;
· 35分鐘完成CD3+細胞的富集或去除;
· 僅1步操作可完成CD3+細胞的富集或去除。
測試數(shù)據(jù)
以C57BL/6小鼠脾細胞為例,使用BeaverBeads? Mouse CD3去除其中的CD3+細胞,通過流式細胞儀分析CD3+細胞占比,分選前和分選后CD3+細胞比例分別為29.92%和0.08%。CD3+細胞去除率可達99.7%。
圖1. 使用流式細胞儀分析分選前后CD3+細胞占比
2.非CD3+細胞狀態(tài)良好,功能正常
使用BeaverBeads? Mouse CD3產(chǎn)品去除C57BL/6小鼠脾細胞中CD3+細胞,鏡下觀察剩余非CD3+細胞。如圖2所示,細胞狀態(tài)良好、邊緣清晰,背景干凈。
圖2. 顯微鏡下觀察分選后非CD3+細胞的形態(tài)
使用LPS刺激分選后的非CD3+細胞,24小時后收集細胞,使用流式細胞儀檢測其中B細胞表面CD69的表達水平。如圖3所示,去除CD3+細胞后的剩余細胞中B細胞可以被LPS正常激活。
圖3. BeaverBeads? Mouse CD3 分選后的細胞用LPS激活24小時,流式細胞儀檢測其中CD19+ B細胞表面CD69的表達水平
與美天旎對比如何?
相同點:均能實現(xiàn)高純度、高活性的細胞分選。
不同點:美天旎磁珠因磁珠粒徑小,磁性弱,需要搭配分選柱進行磁性的放大才能實現(xiàn)細胞分離,操作時長約30-60分鐘(分選柱需預(yù)沖洗、上樣、洗滌等步驟)。海貍細胞分選試劑盒不需要分選柱,僅需磁力架搭配流式管,最快15分鐘(陰選法)即可分離細胞。
普通的磁力架可以用于細胞分選嗎?
用于細胞分選磁力架的磁場強度要>7000Gs,否則會影響細胞分選效果。
推薦海貍細胞分選磁力架(Cat.No: 60205,60205Ⅱ,60206)。
分選T細胞,樣本處理時要活化嗎(加刀豆蛋白活化)?
我們未對激活處理后的脾臟或淋巴細胞進行T細胞分選驗證。
從理論上講,陰選方式由于不直接結(jié)合目標細胞,通常不受激活處理影響;而陽性選擇則可能受到一定影響,尤其是在T細胞激活后某些表面標志物表達發(fā)生變化的情況下,可能存在洗脫效率降低的風(fēng)險。
建議客戶在完成細胞分選后再進行激活處理,可以確保分選效果和細胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
一個試劑盒可以分選幾個小鼠脾臟?
正常情況下,一個脾臟大概的細胞數(shù)量是5x10*7-1x10*8。
但細胞數(shù)量與鼠齡、小鼠品系還有單細胞懸液制備都有關(guān)系.
試劑盒里的biotin antibody mix,有沒有封閉Fc受體(FcR)?
沒有封閉Fc受體
可以分選出原代細胞嗎?
可以,海貍的細胞分選試劑盒,從組織或者其他樣本里分選出來的都是原代細胞。
細胞圈門的時候是把所有的細胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細胞,(要看染的部位,細胞碎片、死細胞染不上)。
E1左下角細胞碎片不要圈,P1圈對角線(單個核細胞)
散點圖在流式上比較分散的原因?
可能是磁吸不充分導(dǎo)致的,可以延長磁吸時間或更換磁性更強的磁力架(>7000Gs)。
做細胞分選用哪款磁珠?
我們自己用的300 nm的SA(Cat. No. 22308C)做細胞分選,包括陽選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA(Cat. No. 22307)自己做分選,效果也很好。
細胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心?
可以,使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細胞分選說明書上要求4℃環(huán)境操作,是否可以在冰上操作?
可以。
分選buffer的配方是什么?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過0.22μm濾膜過濾除菌??梢月?lián)系海貍生物購買預(yù)配制的分選buffer(Cat. No. 80301)。
自己配制分選buffer時建議使用0.5 M的液體EDTA。原因:固體的EDTA比較難溶解,溶解后也可能會有肉眼看不到的顆粒,所以要過0.22μm的濾膜,但過濾膜可能會損失掉部分EDTA,所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進行分選?
因為抗體mix中只有少量的紅細胞抗體,防止有紅細胞殘留,所以需要裂紅。
陰選和陽選試劑盒中抗體的區(qū)別?
陽選中只有一種抗體,即針對目的細胞的抗體;陰選中是抗體mix,含有多種針對非目標細胞的抗體。
陽選與陰選的區(qū)別
陽選法:適用樣本類型多種、復(fù)雜,抗體類型單一,需要解離試劑,直接捕獲,細胞沒有磁珠標記,有抗體標記,操作時長最快80min,不需要分離柱。
陰選法:適用樣本類型相對單一,抗體類型為多種抗體的混合物,不需要解離試劑;間接捕獲,不影響細胞性能;細胞沒有磁珠標記和抗體標記,操作時長最快25min,不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么?海貍可以提供嗎?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過0.22μm濾膜過濾除菌。可以聯(lián)系海貍生物購買預(yù)配制的分選buffer。
細胞樣品制備時需要幾次過篩?具體步驟是什么?
推薦進行2次過篩。
第一次過篩:將樣本置于70 μm細胞篩網(wǎng)篩網(wǎng)上進行研磨/沖洗,收集細胞。
第二次過篩:裂紅完成后,使用PBS重懸細胞,將細胞懸液用70 μm細胞篩網(wǎng)過濾。
若只進行1次過篩,殘留的細胞團塊可能會導(dǎo)致細胞/磁珠聚集,降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎?不清洗有什么影響?
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次(清洗方法見說明書);若不清洗,磁珠保存液中的某些組分(如抑菌劑)可能會影響細胞活性。
抗體和細胞孵育時需要注意什么?
將細胞懸液加到離心管底部,再加入Biotin-Antibody Mix,充分吹打混勻(盡量在底部進行吹打,不要濺到管壁上),4°C孵育 10 min(勿將Ep管插進冰里)。
若孵育時間不足,會使抗體與細胞無法充分結(jié)合,從而導(dǎo)致非目標細胞殘留,影響分選純度。
磁吸時需要注意什么?
要使用細胞分選專業(yè)磁力架,推薦(Cat. No. 60205/60206),靜置5分鐘,磁吸后轉(zhuǎn)移大部分懸液至新管,注意不要吸到磁珠。磁吸時間過短可能會導(dǎo)致部分磁珠未完全吸附,分選后的細胞中有磁珠殘留,且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標準?
常規(guī)離心條件為500 g,5分鐘(磁珠清洗除外,需10000 g,1分鐘)。離心速度過大(超過500g)影響細胞活性。

暫無視頻

暫無應(yīng)用案例