
人CD4+?T細胞分選試劑盒(陰選法)
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本產品可以通過陰性分選法從人外周血單個核細胞(PBMC)中分離出 CD4+ T 細胞。原理是利用生物素(biotin)標記的單克隆抗體對非目標細胞(非 CD4+ T 細胞)進行標記,然后通過鏈霉親和素(streptavidin)標記的磁珠對非目標細胞進行清除,從而達到純化人CD4+ T細胞的目的。分選過程需要用到磁力架。
- 產品貨號:70908-100
- 產品單位:盒
- 產品說明:for 109 cells
本產品可以通過陰性分選法從人外周血單個核細胞(PBMC)中分離出 CD4+ T 細胞。原理是利用生物素(biotin)標記的單克隆抗體對非目標細胞(非 CD4+ T 細胞)進行標記,然后通過鏈霉親和素(streptavidin)標記的磁珠對非目標細胞進行清除,從而達到純化人CD4+ T細胞的目的。分選過程需要用到磁力架。
產品特點:
高純度:分選細胞純度高,人CD4+ T細胞純度可達97.7%; 高活性:分選后細胞活性高達98%以上,可獲得未經抗體和磁珠標記,功能良好的細胞; 無需分離柱:使用磁力架即可實現目的細胞的快速分離。
與美天旎對比如何?
相同點:均能實現高純度、高活性的細胞分選。
不同點:美天旎磁珠因磁珠粒徑小,磁性弱,需要搭配分選柱進行磁性的放大才能實現細胞分離,操作時長約30-60分鐘(分選柱需預沖洗、上樣、洗滌等步驟)。海貍細胞分選試劑盒不需要分選柱,僅需磁力架搭配流式管,最快15分鐘(陰選法)即可分離細胞。
普通的磁力架可以用于細胞分選嗎?
用于細胞分選磁力架的磁場強度要>7000Gs,否則會影響細胞分選效果。
推薦海貍細胞分選磁力架(Cat.No: 60205,60205Ⅱ,60206)。
分選T細胞,樣本處理時要活化嗎(加刀豆蛋白活化)?
我們未對激活處理后的脾臟或淋巴細胞進行T細胞分選驗證。
從理論上講,陰選方式由于不直接結合目標細胞,通常不受激活處理影響;而陽性選擇則可能受到一定影響,尤其是在T細胞激活后某些表面標志物表達發(fā)生變化的情況下,可能存在洗脫效率降低的風險。
建議客戶在完成細胞分選后再進行激活處理,可以確保分選效果和細胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
試劑盒里的biotin antibody mix,有沒有封閉Fc受體(FcR)?
沒有封閉Fc受體
可以分選出原代細胞嗎?
可以,海貍的細胞分選試劑盒,從組織或者其他樣本里分選出來的都是原代細胞。
細胞圈門的時候是把所有的細胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細胞,(要看染的部位,細胞碎片、死細胞染不上)。
E1左下角細胞碎片不要圈,P1圈對角線(單個核細胞)
散點圖在流式上比較分散的原因?
可能是磁吸不充分導致的,可以延長磁吸時間或更換磁性更強的磁力架(>7000Gs)。
做細胞分選用哪款磁珠?
我們自己用的300 nm的SA(Cat. No. 22308C)做細胞分選,包括陽選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA(Cat. No. 22307)自己做分選,效果也很好。
細胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心?
可以,使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細胞分選說明書上要求4℃環(huán)境操作,是否可以在冰上操作?
可以。
分選buffer的配方是什么?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預先通過0.22μm濾膜過濾除菌??梢月?lián)系海貍生物購買預配制的分選buffer(Cat. No. 80301)。
自己配制分選buffer時建議使用0.5 M的液體EDTA。原因:固體的EDTA比較難溶解,溶解后也可能會有肉眼看不到的顆粒,所以要過0.22μm的濾膜,但過濾膜可能會損失掉部分EDTA,所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進行分選?
因為抗體mix中只有少量的紅細胞抗體,防止有紅細胞殘留,所以需要裂紅。
陰選和陽選試劑盒中抗體的區(qū)別?
陽選中只有一種抗體,即針對目的細胞的抗體;陰選中是抗體mix,含有多種針對非目標細胞的抗體。
陽選與陰選的區(qū)別
陽選法:適用樣本類型多種、復雜,抗體類型單一,需要解離試劑,直接捕獲,細胞沒有磁珠標記,有抗體標記,操作時長最快80min,不需要分離柱。
陰選法:適用樣本類型相對單一,抗體類型為多種抗體的混合物,不需要解離試劑;間接捕獲,不影響細胞性能;細胞沒有磁珠標記和抗體標記,操作時長最快25min,不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么?海貍可以提供嗎?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預先通過0.22μm濾膜過濾除菌??梢月?lián)系海貍生物購買預配制的分選buffer。
細胞樣品制備時需要幾次過篩?具體步驟是什么?
推薦進行2次過篩。
第一次過篩:將樣本置于70 μm細胞篩網篩網上進行研磨/沖洗,收集細胞。
第二次過篩:裂紅完成后,使用PBS重懸細胞,將細胞懸液用70 μm細胞篩網過濾。
若只進行1次過篩,殘留的細胞團塊可能會導致細胞/磁珠聚集,降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎?不清洗有什么影響?
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次(清洗方法見說明書);若不清洗,磁珠保存液中的某些組分(如抑菌劑)可能會影響細胞活性。
抗體和細胞孵育時需要注意什么?
將細胞懸液加到離心管底部,再加入Biotin-Antibody Mix,充分吹打混勻(盡量在底部進行吹打,不要濺到管壁上),4°C孵育 10 min(勿將Ep管插進冰里)。
若孵育時間不足,會使抗體與細胞無法充分結合,從而導致非目標細胞殘留,影響分選純度。
磁吸時需要注意什么?
要使用細胞分選專業(yè)磁力架,推薦(Cat. No. 60205/60206),靜置5分鐘,磁吸后轉移大部分懸液至新管,注意不要吸到磁珠。磁吸時間過短可能會導致部分磁珠未完全吸附,分選后的細胞中有磁珠殘留,且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標準?
常規(guī)離心條件為500 g,5分鐘(磁珠清洗除外,需10000 g,1分鐘)。離心速度過大(超過500g)影響細胞活性。

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