小鼠中性粒細(xì)胞分選試劑盒
￥2998.00
- 產(chǎn)品貨號(hào):70907-50
- 產(chǎn)品單位:盒
- 產(chǎn)品說(shuō)明:for 5*10^8 cells
產(chǎn)品特點(diǎn)
操作簡(jiǎn)便、快速：無(wú)需分離柱，搭配磁性分離器使用，最快30min即可完成操作；
高活性、高純度：目的細(xì)胞無(wú)抗體和磁珠標(biāo)記，且純度高達(dá)95%。
評(píng)測(cè)數(shù)據(jù)：
1.不同細(xì)胞樣本的中性粒細(xì)胞分選
使用BeaverBeads? 小鼠中性粒細(xì)胞分選試劑盒，對(duì)比分選前后目的細(xì)胞的純度。
小鼠骨髓細(xì)胞，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度為：45.72%和95.18%。
圖1.1 分選前后的細(xì)胞用PE anti-mouse CD11b（克隆號(hào)M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆號(hào)1A8）標(biāo)記后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。
小鼠脾臟細(xì)胞，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度為：6.30%和91.84%。
圖1.2 分選前后的細(xì)胞用PE anti-mouse CD11b（克隆號(hào)M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆號(hào)1A8）標(biāo)記后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析
小鼠外周血，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度分別為：20.04%和93.82%。
圖1.3 分選前后的細(xì)胞用PE anti-mouse CD11b（克隆號(hào)M1/70）、FITC anti-mouse Ly-6G（克隆號(hào)1A8）標(biāo)記后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析
2.競(jìng)品對(duì)照
純度分析: 分別使用BeaverBeads? 小鼠中性粒細(xì)胞分選試劑盒和進(jìn)口對(duì)照試劑盒分選小鼠骨髓細(xì)胞中的中性粒細(xì)胞，對(duì)分選后的目的細(xì)胞進(jìn)行純度分析。
BEAVER試劑盒得到的CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞純度高達(dá)93.35%，高于對(duì)照試劑盒。
圖2.1 比較BEAVER與對(duì)照試劑盒分選得到的骨髓中性粒細(xì)胞的純度
活率分析: 對(duì)分選得到的中性粒細(xì)胞進(jìn)行活率分析。
BEAVER試劑盒分選得到的CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞活率高達(dá)99.85%，高于對(duì)照試劑盒。
圖2.2 比較BEAVER與對(duì)照試劑盒分選得到的骨髓中性粒細(xì)胞的活率。
與美天旎對(duì)比如何？
相同點(diǎn)：均能實(shí)現(xiàn)高純度、高活性的細(xì)胞分選。
不同點(diǎn)：美天旎磁珠因磁珠粒徑小，磁性弱，需要搭配分選柱進(jìn)行磁性的放大才能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離，操作時(shí)長(zhǎng)約30-60分鐘（分選柱需預(yù)沖洗、上樣、洗滌等步驟）。海貍細(xì)胞分選試劑盒不需要分選柱，僅需磁力架搭配流式管，最快15分鐘（陰選法）即可分離細(xì)胞。
普通的磁力架可以用于細(xì)胞分選嗎？
用于細(xì)胞分選磁力架的磁場(chǎng)強(qiáng)度要>7000Gs，否則會(huì)影響細(xì)胞分選效果。
推薦海貍細(xì)胞分選磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分選T細(xì)胞，樣本處理時(shí)要活化嗎（加刀豆蛋白活化）？
我們未對(duì)激活處理后的脾臟或淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞分選驗(yàn)證。
從理論上講，陰選方式由于不直接結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞，通常不受激活處理影響；而陽(yáng)性選擇則可能受到一定影響，尤其是在T細(xì)胞激活后某些表面標(biāo)志物表達(dá)發(fā)生變化的情況下，可能存在洗脫效率降低的風(fēng)險(xiǎn)。
建議客戶(hù)在完成細(xì)胞分選后再進(jìn)行激活處理，可以確保分選效果和細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
一個(gè)試劑盒可以分選幾個(gè)小鼠脾臟？
正常情況下，一個(gè)脾臟大概的細(xì)胞數(shù)量是5x10*7-1x10*8。
但細(xì)胞數(shù)量與鼠齡、小鼠品系還有單細(xì)胞懸液制備都有關(guān)系.
試劑盒里的biotin antibody mix，有沒(méi)有封閉Fc受體（FcR）？
沒(méi)有封閉Fc受體
可以分選出原代細(xì)胞嗎？
可以，海貍的細(xì)胞分選試劑盒，從組織或者其他樣本里分選出來(lái)的都是原代細(xì)胞。
細(xì)胞圈門(mén)的時(shí)候是把所有的細(xì)胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細(xì)胞，（要看染的部位，細(xì)胞碎片、死細(xì)胞染不上）。
E1左下角細(xì)胞碎片不要圈，P1圈對(duì)角線(xiàn)（單個(gè)核細(xì)胞）
散點(diǎn)圖在流式上比較分散的原因？
可能是磁吸不充分導(dǎo)致的，可以延長(zhǎng)磁吸時(shí)間或更換磁性更強(qiáng)的磁力架（＞7000Gs）。
做細(xì)胞分選用哪款磁珠？
我們自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做細(xì)胞分選，包括陽(yáng)選和陰選。
目前有客戶(hù)用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分選，效果也很好。
細(xì)胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心？
可以，使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細(xì)胞分選說(shuō)明書(shū)上要求4℃環(huán)境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分選buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。可以聯(lián)系海貍生物購(gòu)買(mǎi)預(yù)配制的分選buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分選buffer時(shí)建議使用0.5 M的液體EDTA。原因：固體的EDTA比較難溶解，溶解后也可能會(huì)有肉眼看不到的顆粒，所以要過(guò)0.22μm的濾膜，但過(guò)濾膜可能會(huì)損失掉部分EDTA，所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進(jìn)行分選？
因?yàn)榭贵wmix中只有少量的紅細(xì)胞抗體，防止有紅細(xì)胞殘留，所以需要裂紅。
陰選和陽(yáng)選試劑盒中抗體的區(qū)別？
陽(yáng)選中只有一種抗體，即針對(duì)目的細(xì)胞的抗體；陰選中是抗體mix，含有多種針對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞的抗體。
陽(yáng)選與陰選的區(qū)別
陽(yáng)選法：適用樣本類(lèi)型多種、復(fù)雜，抗體類(lèi)型單一，需要解離試劑，直接捕獲，細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記，有抗體標(biāo)記，操作時(shí)長(zhǎng)最快80min，不需要分離柱。
陰選法：適用樣本類(lèi)型相對(duì)單一，抗體類(lèi)型為多種抗體的混合物，不需要解離試劑；間接捕獲，不影響細(xì)胞性能；細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記和抗體標(biāo)記，操作時(shí)長(zhǎng)最快25min，不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么？海貍可以提供嗎？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌?？梢月?lián)系海貍生物購(gòu)買(mǎi)預(yù)配制的分選buffer。
細(xì)胞樣品制備時(shí)需要幾次過(guò)篩？具體步驟是什么？
推薦進(jìn)行2次過(guò)篩。
第一次過(guò)篩：將樣本置于70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)篩網(wǎng)上進(jìn)行研磨/沖洗，收集細(xì)胞。
第二次過(guò)篩：裂紅完成后，使用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液用70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾。
若只進(jìn)行1次過(guò)篩，殘留的細(xì)胞團(tuán)塊可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞/磁珠聚集，降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎？不清洗有什么影響？
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次（清洗方法見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）；若不清洗，磁珠保存液中的某些組分（如抑菌劑）可能會(huì)影響細(xì)胞活性。
抗體和細(xì)胞孵育時(shí)需要注意什么？
將細(xì)胞懸液加到離心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混勻（盡量在底部進(jìn)行吹打，不要濺到管壁上），4°C孵育 10 min（勿將Ep管插進(jìn)冰里）。
若孵育時(shí)間不足，會(huì)使抗體與細(xì)胞無(wú)法充分結(jié)合，從而導(dǎo)致非目標(biāo)細(xì)胞殘留，影響分選純度。
磁吸時(shí)需要注意什么？
要使用細(xì)胞分選專(zhuān)業(yè)磁力架，推薦（Cat. No. 60205/60206），靜置5分鐘，磁吸后轉(zhuǎn)移大部分懸液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸時(shí)間過(guò)短可能會(huì)導(dǎo)致部分磁珠未完全吸附，分選后的細(xì)胞中有磁珠殘留，且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)？
常規(guī)離心條件為500 g，5分鐘（磁珠清洗除外，需10000 g，1分鐘）。離心速度過(guò)大（超過(guò)500g）影響細(xì)胞活性。
分選后的中性粒細(xì)胞如何保存或使用？
分選后的細(xì)胞懸液可直接用于流式檢測(cè)、細(xì)胞培養(yǎng)、RNA/蛋白提取等實(shí)驗(yàn)；若不立即使用可在4℃短期保存（≤2小時(shí)）。因小鼠中性粒細(xì)胞體外生存周期短，分選后的細(xì)胞，建議盡快安排實(shí)驗(yàn)。
一只小鼠可以取多少骨髓/外周血細(xì)胞？
一般情況下，股骨和脛骨大概2x10^7～5x10^7個(gè)細(xì)胞，因個(gè)人操作差異原因，有所不同。
正常小鼠1ml的外周血可以拿到 2～4 × 10^6個(gè)白細(xì)胞（若小鼠為炎癥模型，白細(xì)胞數(shù)可顯著升高），其中中性粒細(xì)胞占比大概為15%-25%（不同品系有所不同），可以計(jì)算一下最多能提出的中性粒細(xì)胞數(shù)。
中性粒細(xì)胞分選試劑盒的得率是多少？
得率在50%-70%都是正常的（分選前中性粒細(xì)胞占比x總的細(xì)胞數(shù)量x50%-70%）
中性粒細(xì)胞分選純度是多少？
以下是WT小鼠骨髓細(xì)胞、脾臟細(xì)胞、外周血分選前后純度:
小鼠骨髓細(xì)胞，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度為：45.72%和95.18%。
小鼠脾臟細(xì)胞，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度為：6.30%和91.84%。
小鼠外周血，分選前后CD11b+ Ly6G+ 中性粒細(xì)胞的純度分別為：20.04%和93.82%。
本試劑盒適用于哪些樣本類(lèi)型？
適用于分選小鼠骨髓、外周血或脾臟中性粒細(xì)胞，不適用于其他樣本類(lèi)型（如肝臟、肺組織等）。原因在于該試劑盒采用陰選法，用生物素標(biāo)記抗體結(jié)合非目標(biāo)細(xì)胞，再通過(guò)磁珠去除。其他樣本中的非目標(biāo)細(xì)胞類(lèi)型可能不同，缺少對(duì)應(yīng)的抗體標(biāo)記，會(huì)導(dǎo)致分選純度下降。
是否需要裂解紅細(xì)胞？裂解時(shí)需要注意哪些事項(xiàng)？
可根據(jù)樣本類(lèi)型來(lái)決定是否需要裂解紅細(xì)胞（如：小鼠骨髓細(xì)胞不裂解紅細(xì)胞也可直接進(jìn)行分選，但分選細(xì)胞純度可能隨紅細(xì)胞占比增加有5%以?xún)?nèi)小幅度下降）；裂紅時(shí)，可根據(jù)組織樣本及所用裂解液的不同調(diào)整用量及時(shí)間（如：小鼠外周血樣本裂解需要相對(duì)更長(zhǎng)的時(shí)間，若一次裂解不充分，也可進(jìn)行二次裂解）。
細(xì)胞、抗體、磁珠的比例是多少？
每100 μL細(xì)胞懸液（含1×10?個(gè)細(xì)胞）需加入2 μL Biotin-Antibody Mix 和20μL清洗過(guò)的磁珠。分選細(xì)胞數(shù)量增加時(shí)，需按比例擴(kuò)大抗體和磁珠用量（詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）。
細(xì)胞濃度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響分選效果。細(xì)胞濃度過(guò)高時(shí)，細(xì)胞容易聚集，導(dǎo)致抗體和細(xì)胞結(jié)合不充分，部分非目標(biāo)細(xì)胞可能無(wú)法被很好的標(biāo)記，進(jìn)而影響分選純度；細(xì)胞濃度過(guò)低則會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)細(xì)胞得率降低。
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