
小鼠CD4+ 細(xì)胞分選試劑盒(陽選)
¥3470.00
陽選法試劑盒是利用納米磁珠標(biāo)記和富集目的細(xì)胞,再用釋放劑將磁珠從細(xì)胞表面解離,從而得到無磁珠標(biāo)記的目標(biāo)細(xì)胞。
- 產(chǎn)品貨號:70904-100
- 產(chǎn)品單位:盒
- 產(chǎn)品說明:for 1*10^9 cells
產(chǎn)品特點(diǎn)
? 純度達(dá)到95%以上
? 樣本適用性廣,可直接捕獲目的細(xì)胞
? 磁珠釋放技術(shù)細(xì)胞無磁珠標(biāo)記
產(chǎn)品信息
應(yīng)用案例
圖1 BeaverBeads? 小鼠CD4+ 細(xì)胞分選試劑盒(陽選法)分選小鼠脾臟細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分析圖
利用BeaverBeads? 小鼠CD4+ 細(xì)胞分選試劑盒(陽選法)從BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞中分選CD4+細(xì)胞,用PE anti-mouse CD4抗體(克隆號RM4-4)標(biāo)記后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。
結(jié)論:分選前后的CD4+細(xì)胞純度分別為13.3%和97.2% 。
與美天旎對比如何?
相同點(diǎn):均能實(shí)現(xiàn)高純度、高活性的細(xì)胞分選。
不同點(diǎn):美天旎磁珠因磁珠粒徑小,磁性弱,需要搭配分選柱進(jìn)行磁性的放大才能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離,操作時長約30-60分鐘(分選柱需預(yù)沖洗、上樣、洗滌等步驟)。海貍細(xì)胞分選試劑盒不需要分選柱,僅需磁力架搭配流式管,最快15分鐘(陰選法)即可分離細(xì)胞。
普通的磁力架可以用于細(xì)胞分選嗎?
用于細(xì)胞分選磁力架的磁場強(qiáng)度要>7000Gs,否則會影響細(xì)胞分選效果。
推薦海貍細(xì)胞分選磁力架(Cat.No: 60205,60205Ⅱ,60206)。
分選T細(xì)胞,樣本處理時要活化嗎(加刀豆蛋白活化)?
我們未對激活處理后的脾臟或淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞分選驗證。
從理論上講,陰選方式由于不直接結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞,通常不受激活處理影響;而陽性選擇則可能受到一定影響,尤其是在T細(xì)胞激活后某些表面標(biāo)志物表達(dá)發(fā)生變化的情況下,可能存在洗脫效率降低的風(fēng)險。
建議客戶在完成細(xì)胞分選后再進(jìn)行激活處理,可以確保分選效果和細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
一個試劑盒可以分選幾個小鼠脾臟?
正常情況下,一個脾臟大概的細(xì)胞數(shù)量是5x10*7-1x10*8。
但細(xì)胞數(shù)量與鼠齡、小鼠品系還有單細(xì)胞懸液制備都有關(guān)系.
試劑盒里的biotin antibody mix,有沒有封閉Fc受體(FcR)?
沒有封閉Fc受體
可以分選出原代細(xì)胞嗎?
可以,海貍的細(xì)胞分選試劑盒,從組織或者其他樣本里分選出來的都是原代細(xì)胞。
細(xì)胞圈門的時候是把所有的細(xì)胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細(xì)胞,(要看染的部位,細(xì)胞碎片、死細(xì)胞染不上)。
E1左下角細(xì)胞碎片不要圈,P1圈對角線(單個核細(xì)胞)
散點(diǎn)圖在流式上比較分散的原因?
可能是磁吸不充分導(dǎo)致的,可以延長磁吸時間或更換磁性更強(qiáng)的磁力架(>7000Gs)。
做細(xì)胞分選用哪款磁珠?
我們自己用的300 nm的SA(Cat. No. 22308C)做細(xì)胞分選,包括陽選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA(Cat. No. 22307)自己做分選,效果也很好。
細(xì)胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心?
可以,使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細(xì)胞分選說明書上要求4℃環(huán)境操作,是否可以在冰上操作?
可以。
分選buffer的配方是什么?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過0.22μm濾膜過濾除菌??梢月?lián)系海貍生物購買預(yù)配制的分選buffer(Cat. No. 80301)。
自己配制分選buffer時建議使用0.5 M的液體EDTA。原因:固體的EDTA比較難溶解,溶解后也可能會有肉眼看不到的顆粒,所以要過0.22μm的濾膜,但過濾膜可能會損失掉部分EDTA,所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進(jìn)行分選?
因為抗體mix中只有少量的紅細(xì)胞抗體,防止有紅細(xì)胞殘留,所以需要裂紅。
陰選和陽選試劑盒中抗體的區(qū)別?
陽選中只有一種抗體,即針對目的細(xì)胞的抗體;陰選中是抗體mix,含有多種針對非目標(biāo)細(xì)胞的抗體。
陽選與陰選的區(qū)別
陽選法:適用樣本類型多種、復(fù)雜,抗體類型單一,需要解離試劑,直接捕獲,細(xì)胞沒有磁珠標(biāo)記,有抗體標(biāo)記,操作時長最快80min,不需要分離柱。
陰選法:適用樣本類型相對單一,抗體類型為多種抗體的混合物,不需要解離試劑;間接捕獲,不影響細(xì)胞性能;細(xì)胞沒有磁珠標(biāo)記和抗體標(biāo)記,操作時長最快25min,不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么?海貍可以提供嗎?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過0.22μm濾膜過濾除菌。可以聯(lián)系海貍生物購買預(yù)配制的分選buffer。
細(xì)胞樣品制備時需要幾次過篩?具體步驟是什么?
推薦進(jìn)行2次過篩。
第一次過篩:將樣本置于70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)篩網(wǎng)上進(jìn)行研磨/沖洗,收集細(xì)胞。
第二次過篩:裂紅完成后,使用PBS重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液用70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾。
若只進(jìn)行1次過篩,殘留的細(xì)胞團(tuán)塊可能會導(dǎo)致細(xì)胞/磁珠聚集,降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎?不清洗有什么影響?
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次(清洗方法見說明書);若不清洗,磁珠保存液中的某些組分(如抑菌劑)可能會影響細(xì)胞活性。
抗體和細(xì)胞孵育時需要注意什么?
將細(xì)胞懸液加到離心管底部,再加入Biotin-Antibody Mix,充分吹打混勻(盡量在底部進(jìn)行吹打,不要濺到管壁上),4°C孵育 10 min(勿將Ep管插進(jìn)冰里)。
若孵育時間不足,會使抗體與細(xì)胞無法充分結(jié)合,從而導(dǎo)致非目標(biāo)細(xì)胞殘留,影響分選純度。
磁吸時需要注意什么?
要使用細(xì)胞分選專業(yè)磁力架,推薦(Cat. No. 60205/60206),靜置5分鐘,磁吸后轉(zhuǎn)移大部分懸液至新管,注意不要吸到磁珠。磁吸時間過短可能會導(dǎo)致部分磁珠未完全吸附,分選后的細(xì)胞中有磁珠殘留,且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)?
常規(guī)離心條件為500 g,5分鐘(磁珠清洗除外,需10000 g,1分鐘)。離心速度過大(超過500g)影響細(xì)胞活性。

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