人CD3+T細(xì)胞分選試劑盒（陰選）
￥3128.00
本產(chǎn)品可以通過(guò)陰性分選法從人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中分離出 CD3+ T 細(xì)胞。原理是選用生物素（biotin）標(biāo)記的單克隆抗體對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞（非 CD3+ T 細(xì)胞）進(jìn)行標(biāo)記，然后通過(guò)鏈霉親和素（streptavidin）標(biāo)記的磁珠對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行清除，從而達(dá)到人外周血 CD3+ T 細(xì)胞分選的目的。分選過(guò)程需要用到磁力架。
- 產(chǎn)品貨號(hào):71003-50
- 產(chǎn)品單位:盒
- 產(chǎn)品說(shuō)明:for 5×10^8 cells
產(chǎn)品特點(diǎn)
? 快速：最少僅需15分鐘即可分選得到目的細(xì)胞；
? 簡(jiǎn)便：無(wú)需分離柱，使用磁性分離器即可實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的快速分選；
? 高純度：分選細(xì)胞純度可達(dá)95%以上 ；
? 高活性：可獲得活性較高、未經(jīng)抗體和磁珠標(biāo)記、功能良好的細(xì)胞。
應(yīng)用案例
使用BeaverBeads? 人CD3+ T細(xì)胞磁珠法分選試劑盒分選人PBMC中的CD3+ T細(xì)胞，對(duì)分選后的目的細(xì)胞進(jìn)行純度分析
結(jié)論：分選前后的CD3+ T細(xì)胞純度分別為69.1%和97.9%。
圖1. 從人PBMC中分選CD3+ T細(xì)胞，分選前后的細(xì)胞用PE anti-human CD3抗體（克隆號(hào)OKT3）標(biāo)記后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析
與美天旎對(duì)比如何？
相同點(diǎn)：均能實(shí)現(xiàn)高純度、高活性的細(xì)胞分選。
不同點(diǎn)：美天旎磁珠因磁珠粒徑小，磁性弱，需要搭配分選柱進(jìn)行磁性的放大才能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離，操作時(shí)長(zhǎng)約30-60分鐘（分選柱需預(yù)沖洗、上樣、洗滌等步驟）。海貍細(xì)胞分選試劑盒不需要分選柱，僅需磁力架搭配流式管，最快15分鐘（陰選法）即可分離細(xì)胞。
普通的磁力架可以用于細(xì)胞分選嗎？
用于細(xì)胞分選磁力架的磁場(chǎng)強(qiáng)度要>7000Gs，否則會(huì)影響細(xì)胞分選效果。
推薦海貍細(xì)胞分選磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分選T細(xì)胞，樣本處理時(shí)要活化嗎（加刀豆蛋白活化）？
我們未對(duì)激活處理后的脾臟或淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞分選驗(yàn)證。
從理論上講，陰選方式由于不直接結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞，通常不受激活處理影響；而陽(yáng)性選擇則可能受到一定影響，尤其是在T細(xì)胞激活后某些表面標(biāo)志物表達(dá)發(fā)生變化的情況下，可能存在洗脫效率降低的風(fēng)險(xiǎn)。
建議客戶在完成細(xì)胞分選后再進(jìn)行激活處理，可以確保分選效果和細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
試劑盒里的biotin antibody mix，有沒(méi)有封閉Fc受體（FcR）？
沒(méi)有封閉Fc受體
可以分選出原代細(xì)胞嗎？
可以，海貍的細(xì)胞分選試劑盒，從組織或者其他樣本里分選出來(lái)的都是原代細(xì)胞。
細(xì)胞圈門的時(shí)候是把所有的細(xì)胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細(xì)胞，（要看染的部位，細(xì)胞碎片、死細(xì)胞染不上）。
E1左下角細(xì)胞碎片不要圈，P1圈對(duì)角線（單個(gè)核細(xì)胞）
散點(diǎn)圖在流式上比較分散的原因？
可能是磁吸不充分導(dǎo)致的，可以延長(zhǎng)磁吸時(shí)間或更換磁性更強(qiáng)的磁力架（＞7000Gs）。
做細(xì)胞分選用哪款磁珠？
我們自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做細(xì)胞分選，包括陽(yáng)選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分選，效果也很好。
細(xì)胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心？
可以，使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細(xì)胞分選說(shuō)明書上要求4℃環(huán)境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分選buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌?？梢月?lián)系海貍生物購(gòu)買預(yù)配制的分選buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分選buffer時(shí)建議使用0.5 M的液體EDTA。原因：固體的EDTA比較難溶解，溶解后也可能會(huì)有肉眼看不到的顆粒，所以要過(guò)0.22μm的濾膜，但過(guò)濾膜可能會(huì)損失掉部分EDTA，所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進(jìn)行分選？
因?yàn)榭贵wmix中只有少量的紅細(xì)胞抗體，防止有紅細(xì)胞殘留，所以需要裂紅。
陰選和陽(yáng)選試劑盒中抗體的區(qū)別？
陽(yáng)選中只有一種抗體，即針對(duì)目的細(xì)胞的抗體；陰選中是抗體mix，含有多種針對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞的抗體。
陽(yáng)選與陰選的區(qū)別
陽(yáng)選法：適用樣本類型多種、復(fù)雜，抗體類型單一，需要解離試劑，直接捕獲，細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記，有抗體標(biāo)記，操作時(shí)長(zhǎng)最快80min，不需要分離柱。
陰選法：適用樣本類型相對(duì)單一，抗體類型為多種抗體的混合物，不需要解離試劑；間接捕獲，不影響細(xì)胞性能；細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記和抗體標(biāo)記，操作時(shí)長(zhǎng)最快25min，不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么？海貍可以提供嗎？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌?？梢月?lián)系海貍生物購(gòu)買預(yù)配制的分選buffer。
細(xì)胞樣品制備時(shí)需要幾次過(guò)篩？具體步驟是什么？
推薦進(jìn)行2次過(guò)篩。
第一次過(guò)篩：將樣本置于70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)篩網(wǎng)上進(jìn)行研磨/沖洗，收集細(xì)胞。
第二次過(guò)篩：裂紅完成后，使用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液用70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾。
若只進(jìn)行1次過(guò)篩，殘留的細(xì)胞團(tuán)塊可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞/磁珠聚集，降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎？不清洗有什么影響？
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次（清洗方法見(jiàn)說(shuō)明書）；若不清洗，磁珠保存液中的某些組分（如抑菌劑）可能會(huì)影響細(xì)胞活性。
抗體和細(xì)胞孵育時(shí)需要注意什么？
將細(xì)胞懸液加到離心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混勻（盡量在底部進(jìn)行吹打，不要濺到管壁上），4°C孵育 10 min（勿將Ep管插進(jìn)冰里）。
若孵育時(shí)間不足，會(huì)使抗體與細(xì)胞無(wú)法充分結(jié)合，從而導(dǎo)致非目標(biāo)細(xì)胞殘留，影響分選純度。
磁吸時(shí)需要注意什么？
要使用細(xì)胞分選專業(yè)磁力架，推薦（Cat. No. 60205/60206），靜置5分鐘，磁吸后轉(zhuǎn)移大部分懸液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸時(shí)間過(guò)短可能會(huì)導(dǎo)致部分磁珠未完全吸附，分選后的細(xì)胞中有磁珠殘留，且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)？
常規(guī)離心條件為500 g，5分鐘（磁珠清洗除外，需10000 g，1分鐘）。離心速度過(guò)大（超過(guò)500g）影響細(xì)胞活性。
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