
小鼠CD8+ T細(xì)胞磁珠法分選試劑盒(陰選法)
¥2998.00
- 產(chǎn)品貨號(hào):70902-50
- 產(chǎn)品單位:盒
- 產(chǎn)品說(shuō)明:for 5*10^8 cells
小鼠 CD8+ T 細(xì)胞分選試劑盒是通過(guò)陰性分選法從小鼠脾臟細(xì)胞或其它組織的單細(xì)胞懸液中分離出 CD8+ T 細(xì)胞。原理是選用不同的生物素(biotin)標(biāo)記單克隆抗體對(duì)非目的細(xì)胞(非 CD8+T 細(xì)胞)進(jìn)行標(biāo) 記,而后通過(guò)鏈霉親和素(streptavidin)標(biāo)記的磁珠對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行清除,從而達(dá)到小鼠 CD8+ T 細(xì)胞 分選的目的。分選過(guò)程需要用到磁吸分離器。
產(chǎn)品特點(diǎn):
簡(jiǎn)單、快速:15分鐘即可分選得到目的細(xì)胞;
無(wú)需分離柱:使用磁性分離器即可實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的快速分離;
高純度:分選細(xì)胞純度可達(dá)95%以上;
高活性:分選后可獲得99%以上的活性細(xì)胞、且細(xì)胞功能良好。
產(chǎn)品使用效果:
圖1. BeaverBeads?分選小鼠脾臟CD8+ T細(xì)胞后, CD8+ T細(xì)胞的純度檢測(cè)結(jié)果
圖1. 使用BeaverBeads Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit (negative selection)從C57BL/6小鼠脾臟細(xì)胞中分選CD8+ T細(xì)胞。分選前和分選后的細(xì)胞用FITC標(biāo)記的anti-mouse CD8抗體(克隆號(hào)53-6.7)染色后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析,分選前后的CD8+ T細(xì)胞純度分別為13.8%和97.1%。
與美天旎對(duì)比如何?
相同點(diǎn):均能實(shí)現(xiàn)高純度、高活性的細(xì)胞分選。
不同點(diǎn):美天旎磁珠因磁珠粒徑小,磁性弱,需要搭配分選柱進(jìn)行磁性的放大才能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離,操作時(shí)長(zhǎng)約30-60分鐘(分選柱需預(yù)沖洗、上樣、洗滌等步驟)。海貍細(xì)胞分選試劑盒不需要分選柱,僅需磁力架搭配流式管,最快15分鐘(陰選法)即可分離細(xì)胞。
普通的磁力架可以用于細(xì)胞分選嗎?
用于細(xì)胞分選磁力架的磁場(chǎng)強(qiáng)度要>7000Gs,否則會(huì)影響細(xì)胞分選效果。
推薦海貍細(xì)胞分選磁力架(Cat.No: 60205,60205Ⅱ,60206)。
分選T細(xì)胞,樣本處理時(shí)要活化嗎(加刀豆蛋白活化)?
我們未對(duì)激活處理后的脾臟或淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞分選驗(yàn)證。
從理論上講,陰選方式由于不直接結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞,通常不受激活處理影響;而陽(yáng)性選擇則可能受到一定影響,尤其是在T細(xì)胞激活后某些表面標(biāo)志物表達(dá)發(fā)生變化的情況下,可能存在洗脫效率降低的風(fēng)險(xiǎn)。
建議客戶在完成細(xì)胞分選后再進(jìn)行激活處理,可以確保分選效果和細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性。
一個(gè)試劑盒可以分選幾個(gè)小鼠脾臟?
正常情況下,一個(gè)脾臟大概的細(xì)胞數(shù)量是5x10*7-1x10*8。
但細(xì)胞數(shù)量與鼠齡、小鼠品系還有單細(xì)胞懸液制備都有關(guān)系.
試劑盒里的biotin antibody mix,有沒(méi)有封閉Fc受體(FcR)?
沒(méi)有封閉Fc受體
可以分選出原代細(xì)胞嗎?
可以,海貍的細(xì)胞分選試劑盒,從組織或者其他樣本里分選出來(lái)的都是原代細(xì)胞。
細(xì)胞圈門的時(shí)候是把所有的細(xì)胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細(xì)胞,(要看染的部位,細(xì)胞碎片、死細(xì)胞染不上)。
E1左下角細(xì)胞碎片不要圈,P1圈對(duì)角線(單個(gè)核細(xì)胞)
散點(diǎn)圖在流式上比較分散的原因?
可能是磁吸不充分導(dǎo)致的,可以延長(zhǎng)磁吸時(shí)間或更換磁性更強(qiáng)的磁力架(>7000Gs)。
做細(xì)胞分選用哪款磁珠?
我們自己用的300 nm的SA(Cat. No. 22308C)做細(xì)胞分選,包括陽(yáng)選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA(Cat. No. 22307)自己做分選,效果也很好。
細(xì)胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心?
可以,使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細(xì)胞分選說(shuō)明書(shū)上要求4℃環(huán)境操作,是否可以在冰上操作?
可以。
分選buffer的配方是什么?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。可以聯(lián)系海貍生物購(gòu)買預(yù)配制的分選buffer(Cat. No. 80301)。
自己配制分選buffer時(shí)建議使用0.5 M的液體EDTA。原因:固體的EDTA比較難溶解,溶解后也可能會(huì)有肉眼看不到的顆粒,所以要過(guò)0.22μm的濾膜,但過(guò)濾膜可能會(huì)損失掉部分EDTA,所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進(jìn)行分選?
因?yàn)榭贵wmix中只有少量的紅細(xì)胞抗體,防止有紅細(xì)胞殘留,所以需要裂紅。
陰選和陽(yáng)選試劑盒中抗體的區(qū)別?
陽(yáng)選中只有一種抗體,即針對(duì)目的細(xì)胞的抗體;陰選中是抗體mix,含有多種針對(duì)非目標(biāo)細(xì)胞的抗體。
陽(yáng)選與陰選的區(qū)別
陽(yáng)選法:適用樣本類型多種、復(fù)雜,抗體類型單一,需要解離試劑,直接捕獲,細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記,有抗體標(biāo)記,操作時(shí)長(zhǎng)最快80min,不需要分離柱。
陰選法:適用樣本類型相對(duì)單一,抗體類型為多種抗體的混合物,不需要解離試劑;間接捕獲,不影響細(xì)胞性能;細(xì)胞沒(méi)有磁珠標(biāo)記和抗體標(biāo)記,操作時(shí)長(zhǎng)最快25min,不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么?海貍可以提供嗎?
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌??梢月?lián)系海貍生物購(gòu)買預(yù)配制的分選buffer。
細(xì)胞樣品制備時(shí)需要幾次過(guò)篩?具體步驟是什么?
推薦進(jìn)行2次過(guò)篩。
第一次過(guò)篩:將樣本置于70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)篩網(wǎng)上進(jìn)行研磨/沖洗,收集細(xì)胞。
第二次過(guò)篩:裂紅完成后,使用PBS重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液用70 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾。
若只進(jìn)行1次過(guò)篩,殘留的細(xì)胞團(tuán)塊可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞/磁珠聚集,降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎?不清洗有什么影響?
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次(清洗方法見(jiàn)說(shuō)明書(shū));若不清洗,磁珠保存液中的某些組分(如抑菌劑)可能會(huì)影響細(xì)胞活性。
抗體和細(xì)胞孵育時(shí)需要注意什么?
將細(xì)胞懸液加到離心管底部,再加入Biotin-Antibody Mix,充分吹打混勻(盡量在底部進(jìn)行吹打,不要濺到管壁上),4°C孵育 10 min(勿將Ep管插進(jìn)冰里)。
若孵育時(shí)間不足,會(huì)使抗體與細(xì)胞無(wú)法充分結(jié)合,從而導(dǎo)致非目標(biāo)細(xì)胞殘留,影響分選純度。
磁吸時(shí)需要注意什么?
要使用細(xì)胞分選專業(yè)磁力架,推薦(Cat. No. 60205/60206),靜置5分鐘,磁吸后轉(zhuǎn)移大部分懸液至新管,注意不要吸到磁珠。磁吸時(shí)間過(guò)短可能會(huì)導(dǎo)致部分磁珠未完全吸附,分選后的細(xì)胞中有磁珠殘留,且影響分選純度。
離心條件是否有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)?
常規(guī)離心條件為500 g,5分鐘(磁珠清洗除外,需10000 g,1分鐘)。離心速度過(guò)大(超過(guò)500g)影響細(xì)胞活性。
小鼠CD8+ T細(xì)胞磁珠法分選試劑盒(陰選法)可以用胸腺細(xì)胞嗎?分選效率低的原因?
不建議使用胸腺樣本,陰選試劑盒對(duì)樣本要求比較嚴(yán)格,只適合脾臟和淋巴結(jié)。陰選是抗體結(jié)合非目的細(xì)胞,胸腺中非目的細(xì)胞的種類可能多于脾臟和淋巴結(jié),所以效率低。
可以試用陽(yáng)選試劑盒,但分選出來(lái)的是CD4+細(xì)胞(包含CD4+T細(xì)胞),不全是CD4+T細(xì)胞。同樣,陰選試劑盒不適和分選雙陽(yáng)性細(xì)胞(CD4+T和CD8+T細(xì)胞)。
哪款磁珠可以用于細(xì)胞激活?
如果用于T細(xì)胞激活,推薦5μm SA(Cat. No. 22306)和5μm (Cat. No. 70105)羧基磁珠。
小鼠CD8+T細(xì)胞磁珠法分選試劑盒可以用于腫瘤細(xì)胞嗎?
理論上可以使用小鼠CD8+細(xì)胞磁珠法分選試劑盒(陽(yáng)選法)(Cat. No. 70905)。

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