免疫親和磁珠-白醋黃曲霉毒素-光化學(xué)衍生/HPLC應(yīng)用
免疫親和磁珠-白醋黃曲霉毒素-光化學(xué)衍生/HPLC應(yīng)用
1.前言
本方法采樣免疫親和磁珠凈化結(jié)合柱后光化學(xué)衍生-HPLC方法檢測(cè)了白米醋中的4種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。樣品提取后經(jīng)過免疫親和磁珠凈化，進(jìn)入HPLC系統(tǒng)進(jìn)行分離，定量。四種黃曲霉毒素1ppb和200ppb的加標(biāo)回收率均大于100%，CV小于10%。實(shí)驗(yàn)證明，該方法可有效、準(zhǔn)確的用于白米醋等樣品中黃曲霉毒素的測(cè)定。
2.樣本前處理方法
稱取5g待測(cè)樣品，加入20mL提取液，渦旋提取20min，然后7000r離心5min。取1mL上清液進(jìn)入樣品孔，將黃曲霉毒素凈化試劑預(yù)裝板條（Cat.71101）放入海貍?cè)詣?dòng)凈化儀，運(yùn)行程序。程序運(yùn)行結(jié)束后收集洗脫液，過0.22μm濾膜，待測(cè)。
3.實(shí)驗(yàn)條件
HPLC方法（光化學(xué)柱后衍生） | |
色譜柱 | C18 柱（柱長(zhǎng) 150 mm 或 250 mm，柱內(nèi)徑 4.6 mm，填料粒徑 5 μm），或性能相當(dāng)色譜柱 |
熒光檢測(cè)波長(zhǎng) | 激發(fā)波長(zhǎng) 360 nm；發(fā)射波長(zhǎng) 440 nm。 |
流動(dòng)相A | 甲醇-乙腈（體積比，50:50） |
流動(dòng)相B | 水 |
等度洗脫 | A:B = 35:65 |
流速 | 1.0 mL/min |
柱溫 | 40 ℃ |
進(jìn)樣量 | 20 μL |
4.樣品分析
分別配制四種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1ppb和200ppb，按照上述HPLC方法分析1ppb加標(biāo)回收率為105.7%，200ppb加標(biāo)回收率為121.95%。
樣品名稱 | 樣品質(zhì)量/g | 加標(biāo) | 提取液 | 回收率 |
白米醋 | 5.09 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 122.20% |
白米醋 | 5.07 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 121.70% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 109.00% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 102.40% |
圖1 白米醋樣品（1ppb）色譜圖（上）和黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)譜圖（下）分別是黃曲霉毒素G2，G1，B2，B1
5.結(jié)論
本方法采樣免疫親和磁珠凈化結(jié)合柱后光化學(xué)衍生-HPLC方法檢出了白米醋中的4種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。在保證四種黃曲霉毒素的分離度的前提下，將凈化時(shí)間縮短至1小時(shí)左右，效果明顯。實(shí)驗(yàn)證明該方法可用于實(shí)際樣品中黃曲霉毒素的準(zhǔn)確測(cè)定。
